转基因为什么不能直接用PCR产物连接在表达载体上?我在做小麦转基因到拟南芥中,今天在想为什么不能把目标基因PCR后直接表达载体构建,而要用克隆载体后再构建表达载体?

来源：学生作业帮助网编辑：作业帮时间：2024/04/28 21:36:47

转基因为什么不能直接用PCR产物连接在表达载体上?我在做小麦转基因到拟南芥中,今天在想为什么不能把目标基因PCR后直接表达载体构建,而要用克隆载体后再构建表达载体?
转基因为什么不能直接用PCR产物连接在表达载体上?
我在做小麦转基因到拟南芥中,今天在想为什么不能把目标基因PCR后直接表达载体构建,而要用克隆载体后再构建表达载体?

转基因为什么不能直接用PCR产物连接在表达载体上?我在做小麦转基因到拟南芥中,今天在想为什么不能把目标基因PCR后直接表达载体构建,而要用克隆载体后再构建表达载体?
当然是可以直接将目标基因PCR后直接连到表达载体上的.但实际上在操作过程中,我们都是推荐先将目标基因的PCR产物连接到克隆载体上后再用于构建表达载体.原因是首先如果是未知序列的话,需要用克隆载体来对这段序列进行测定,然后好确定序列中的酶切位点,为下一步表达载体的构建策略提供必要的信息.然后,即使是序列很确定的基因,一般也会先装在克隆载体上.主要是因为你没办法保证你的序列的重复性.如果直接用PCR产物的话,由于你的模板并不一定是完全一致的,即使有少量的mRNA有碱基错配,很有可能就在PCR反应中这些错误的mRNA反转录的cDNA就被无限放大了,这样你连上去的序列就不一定准确了.但如果是装入克隆载体的序列,从克隆载体上获得的序列就有绝对的一致性,这样结果才有说服性.最后一点就是,连在克隆载体上的片段是很稳定的,你以后进行实验的时候还能保证可以获得完全一致的片段.但如果重新RT-PCR,这结果就有几率不同了.当然,对于已知序列直接PCR产物连接表达载体是很少几率出错的,这样做实际上是为了实验结果的严谨.

酷似是为了测序方便，有时候表达载体不能进行测序，或者说不方便，就需要经过一次亚克隆。当然，如果表达载体可以用通用引物测序就可以一步到位进行连接，测序证实没有突变就可以去表达了。

一是测序方便，有通用引物嘛~二是提高连接效率~

转基因为什么不能直接用PCR产物连接在表达载体上?我在做小麦转基因到拟南芥中,今天在想为什么不能把目标基因PCR后直接表达载体构建,而要用克隆载体后再构建表达载体? PCR纯化产物为什么能直接连接,什么情况下直接连接?求高手指教. 如果PCR产物可以直接用来测序,但为什么还需要买PCR产物纯化试剂盒,还要进行连接转化提质粒酶切?我的实验是在PCR产物电泳后发现有自己所需要的长度的目的片段.如果直接测序和经过连接转为什么pcr扩增得到的目的基因不能直接用于连接反应 PCR产物纯化后,连接载体PGMT,转化如DH5α后为何不能直接测序,还要再酶切和提取质粒呢? PCR产物可以直接测序吗荧光定量PCR的扩增产物长度为什么不能太长? PCR产物测序问题用PCR产物直接测序,PCR产物是1200bp左右,但是测出来只有1000bp,请问为什么少了这么多序列呢,我是新手,刚开始做,很多不懂得,望请指教, pcr产物不纯化直接酶切连接可以吗?PCR反应的buffer会不会对酶产生影响哦~ 为什么杂交前要把PCR产物变性为什么可以利用35S启动子检测转基因植物杂交或者转基因农作物收获的果实为什么不能直接当种子用? PCR产物直接测序的原理过短的PCR产物为什么不适于直接测序? 我loading buffer直接加到PCR产物中了,不知道影不影响PCR产物直接纯化PCR产物出来后直接加了loading buffer,然后取5ul走的电泳,剩余的PCR产物含有loading buffer,不知道能不能直接用PCR纯化试剂盒纯化,l 在做荧光定量PCR时,PCR仪检测不到荧光信号,但是产物用琼脂糖电泳后有清晰的目的条带,请问这是为什么? PCR产物纯化时用的是什么纯化,扩增完直接纯,还是要跑胶? 为什么我们进行16S rDNA测序时,要将扩增产物导入的细菌中,而不直接对纯化后的PCR产物直接测序? PCR产物跑电泳为什么跑不出孔,