Western blot 条带 十孔梳子,第一孔加5ul Marker,第二、第六、第十孔,加了同样的样品同样的量,洗出来的条带,第二、第九孔很淡,第六孔很深,为什么有这么大的差别?我自己界定的原因:1、在孵育

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/05/04 08:50:02
Western blot 条带 十孔梳子,第一孔加5ul Marker,第二、第六、第十孔,加了同样的样品同样的量,洗出来的条带,第二、第九孔很淡,第六孔很深,为什么有这么大的差别?我自己界定的原因:1、在孵育

Western blot 条带 十孔梳子,第一孔加5ul Marker,第二、第六、第十孔,加了同样的样品同样的量,洗出来的条带,第二、第九孔很淡,第六孔很深,为什么有这么大的差别?我自己界定的原因:1、在孵育
Western blot 条带
十孔梳子,第一孔加5ul Marker,第二、第六、第十孔,加了同样的样品同样的量,洗出来的条带,第二、第九孔很淡,第六孔很深,为什么有这么大的差别?
我自己界定的原因:
1、在孵育一抗、二抗时,用封口膜包的PDVF膜,导致两边的一抗、二抗与PDVF膜接触不充分导致的?
2、Tris*Hcl的PH值出现了问题?因为有一个月没有调PH值了
3、机器不用怀疑,刚买的新的(因为用Actin做的时候,颜色差别不大)
请专业人士帮助我,必要时,进一步提高悬赏至100分。

Western blot 条带 十孔梳子,第一孔加5ul Marker,第二、第六、第十孔,加了同样的样品同样的量,洗出来的条带,第二、第九孔很淡,第六孔很深,为什么有这么大的差别?我自己界定的原因:1、在孵育
转膜有问题吗?转膜时那些条带有气泡产生吗?请问你做了这些样品对应的actin内参了吗?丽春红染色显示的条带怎样?若内参没问题,是不是你加底物没有弄均匀?你的一抗和二抗什么条件?

孵育的时候为什么用封口膜 难道不是全部浸泡的么
不过这种事真的很正常的 也可能你显影的时候弄的不均匀什么的 或者你转膜的时候有气泡 或者转膜的时候电压不均匀什么的 就算完完全全没有问题的操作走下来也可能这样 WB的时候结果乱七八糟真的很正常~...

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孵育的时候为什么用封口膜 难道不是全部浸泡的么
不过这种事真的很正常的 也可能你显影的时候弄的不均匀什么的 或者你转膜的时候有气泡 或者转膜的时候电压不均匀什么的 就算完完全全没有问题的操作走下来也可能这样 WB的时候结果乱七八糟真的很正常~

收起

你的移液枪是不是该校准了?
你确定你每次都把枪里的样品都挤压出来了吗?