PCR产物测序问题.我用简并引物扩增未知基因.设计了几对引物.都出现了目的条带.发现其中两对引物的产物长度比较长.因为我最终是要拿到这个未知基因的全长.我想选择最长的目的条带去测

来源：学生作业帮助网编辑：作业帮时间：2024/05/08 13:11:51

PCR产物测序问题.我用简并引物扩增未知基因.设计了几对引物.都出现了目的条带.发现其中两对引物的产物长度比较长.因为我最终是要拿到这个未知基因的全长.我想选择最长的目的条带去测
PCR产物测序问题.
我用简并引物扩增未知基因.设计了几对引物.都出现了目的条带.发现其中两对引物的产物长度比较长.因为我最终是要拿到这个未知基因的全长.我想选择最长的目的条带去测序.最后用RACE扩增全长的时候就能省点力气.还有,可不可以直接胶回收纯化送去测序?省掉TA克隆.我的目的片段长度1300BP.没分了.

PCR产物测序问题.我用简并引物扩增未知基因.设计了几对引物.都出现了目的条带.发现其中两对引物的产物长度比较长.因为我最终是要拿到这个未知基因的全长.我想选择最长的目的条带去测
PCR 产物测序的最大风险是有在凝胶上看起来的一个条带,实际上有多个分子.也就是说长度相似的分子有可能在电泳的时候只有一条带.如果只是进行PCR产物回收,没有进行凝胶分离的过程的话,东西可能更多了.问题就在于,如果出现双峰或者多峰,这个样品就白送了,什么也结果也没有.
特别你现在用的还是简并引物,本身目标就是为了能扩增出目标片段来,比较建议先做TA克隆,然后测序的时候,最好挑几个克隆去测,不要只送一个克隆.现在测序也不贵,这样一次测上几个克隆,也可以确认在扩增出来的片段中,是否只有一个分子,还是其实有多个不同序列的片段.
另外,长度选择的问题,既然设计了简并引物,就是要钓取目前序列还未知的基因,可以选择从长片段开始测序,根据这个结果再考虑短的片段是否需要再继续测序.只有拿到目标序列了,才能决定下一步采用什么方式来获得全长的基因片段.

PCR产物也可以直接拿过去测序，如果你的PCR产物只有一条带的话（可要确定哦），当然只是价格稍贵。因为公司拿过去也要克隆转化后才能测序，其实TA克隆已经很容易的啦！

PCR产物测序问题.我用简并引物扩增未知基因.设计了几对引物.都出现了目的条带.发现其中两对引物的产物长度比较长.因为我最终是要拿到这个未知基因的全长.我想选择最长的目的条带去测 RT-PCR模板选择问题.我是准备设计简并引物扩增一个鱼类的未知基因的保守区.一些文献上是提取脑部总RNA,然后反转录得到第一链CDNA,然后用这CDNA做模板扩增保守区.但是我老师的想法是直接提用mRNA做模板PCR的问题?用双链DNA扩增的原理比较好理解,而用单链的RNA扩增怎么设计引物呢?产物是双链DNA吗 PCR扩增不出就引物有问题吗? PCR扩增不出就引物有问题吗? 简并引物的pcr扩增我照文献报道的虾的一个基因的保守区的简并引物及其pcr的条件,试着扩增蟹的这种基因,死活扩不出条带.于是我用虾的cdna做模板试下也没扩出带来?这是什么原因啊?优化了单引物扩增产物能测序吗?我在扩增时 PCR扩增为什么要用正反向两个引物!而PCR测序反应只需一个引物呢? PCR引物的问题PCR时,单引物可以扩增模板吗? 简并引物特异引物还有16s的引物有什么不同用它们PCR出来的产物看条带能看出来吗我PCR产物大小141bp,纯化后,连接到pGEM-T载体克隆,使用M13通用引物,扩增片段长度是多少?我想知道假如用pGEM-T通用引物M13F 5'TGTAAAACGACGGCCAGT3'和M13 RV 5'CAGGAAACAGCTATGACC3'引物进行菌液PCR,扩增出的片段 PCR的引物5‘端用荧光标记后扩增出的产物都有荧光标记吗高中生物pcr扩增引物是什么特异引物PCR问题各位大牛,小弟初涉分子生物实验,最近在用设计好的特异性引物扩增保守序列,可是总也是扩增不出来,常常是只有引物二聚体,没有任何扩增条带,我也试着在引物报告单上所给关于PCR合成的问题PCR扩增方向是5‘到3’,那它用的引物在扩增的时候方向是怎么的呀? 在PCR产物基础上如何设计RACE引物,其原理是怎样的?我未做过RACE.看了你对“未知基因扩增”的回答,觉得你是个专家.也许我没说清楚。按某同源基因的保守序列扩增好了基因的内部连段，然后 tail-pcr产物测序问题tail-pcr第三轮产物如果较大,比如3个KB,我想分两段测序,怎么设计中间的引物啊, 请问PCR扩增中加入引物有什么用?