农杆菌转化法的步骤急用 写出农杆菌转化法的步骤

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/05/07 16:20:16
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农杆菌转化法的步骤
急用
写出农杆菌转化法的步骤

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1、获取目的基因.用限制酶切割下目的基因.
2、基因表达载体的构建.将目的基因与载体（大多数选用质粒）用DNA连接酶连接起来.
3、将目的基因导入受体细胞.将含目的基因的重组质粒导入农杆菌（农杆菌为受体细胞）.
4、目的基因的检测与鉴定.用DNA分子杂交技术/分子杂交技术/抗原-抗体杂交/个体生物学水平鉴定（这个方法需要导入重组后的细胞的植物体,详见第五步） 几种方法进行检验（根据要求选取不同方法）.
5、最后将成功表达的细胞导入植物体内,对植物体进行个体生物学水平鉴定.

转化前一天将需要做转化的野生型拟南芥苗子浇水浇透。
于中午12点接菌于有YEP培养液的试管中10ul：10ml接种。28℃，3000rpm摇过夜，约30小时，次日下午6点将已摇活的菌按（1：400）及750ul菌液转至汉300毫升YEP+K50+Rif中培养28℃，300rpm约14小时，次日上午8点测OD值，用YEP+Rif作为空白对照，当菌液达到OD600为1.5~3.0之内时，可收集...

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转化前一天将需要做转化的野生型拟南芥苗子浇水浇透。
于中午12点接菌于有YEP培养液的试管中10ul：10ml接种。28℃，3000rpm摇过夜，约30小时，次日下午6点将已摇活的菌按（1：400）及750ul菌液转至汉300毫升YEP+K50+Rif中培养28℃，300rpm约14小时，次日上午8点测OD值，用YEP+Rif作为空白对照，当菌液达到OD600为1.5~3.0之内时，可收集菌体于250ml离心瓶（灭菌）,4℃，4000g 离心10min 。用10%蔗糖（含0.02%silwet）稀释至OD600 约为0.8-- 1.0左右即，用10%蔗糖作对照。转化时将花在溶液中浸泡50s左右，于弱光下生长。

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