作业帮请问做反转录有哪些注意事项吗?我做完反转录后跑PCR什么条带都没有,可觉得RNA质量没问题,
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/05/05 16:56:08
请问做反转录有哪些注意事项吗?我做完反转录后跑PCR什么条带都没有,可觉得RNA质量没问题,
请问做反转录有哪些注意事项吗?我做完反转录后跑PCR什么条带都没有,可觉得RNA质量没问题,
请问做反转录有哪些注意事项吗?我做完反转录后跑PCR什么条带都没有,可觉得RNA质量没问题,
RNA质量没问题,按照试剂盒说明书进行反转录操作就行了
可以用actin为内参扩一下,如果扩出来了,就是你自己设计的引物问题,得重新设计引物,如果扩不出来,就是你反转录CDNA的质量问题了,用其他的反转录试剂盒试试
避免RNase的污染，冲提取RNA开始就应该注意这个问题；
反转录结束后一般选择一个高表达的基因做PCR，如actin，检测反转录有没有成功。
反转录酶也要注意保护好，避免失活，在加入RTase的时候，要注意等到前一步骤的温度降下来后才能加入。
避免RNase的污染，建议用TRNsol（Trizol）来提取。提RNA最大的要诀就是快。毕竟要创造一个绝代无RNase的环境是不可能，快，就能减少RNase的影响时间。
做反转录是用试剂盒还是自己配试剂？自己配制是否使用了RNase抑制剂？是否有做阳性对照？如果对照有信号，而目标产物无，很大可能是引物有问题。否则，可以使用下一步法（one step RT-PCR),这样能减少操作步骤。...
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避免RNase的污染，建议用TRNsol（Trizol）来提取。提RNA最大的要诀就是快。毕竟要创造一个绝代无RNase的环境是不可能，快，就能减少RNase的影响时间。
做反转录是用试剂盒还是自己配试剂？自己配制是否使用了RNase抑制剂？是否有做阳性对照？如果对照有信号，而目标产物无，很大可能是引物有问题。否则，可以使用下一步法（one step RT-PCR),这样能减少操作步骤。
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